Gespeichert in:
Titel: | Ein Verfahren zur Verwendung eines integrierten Gaußschen Puff-Modells bei der Ermittlung von Diffusionsparametern aus Tracerexperimente |
---|---|
Von: |
Detlev Frömming
|
Person: |
Frömming, Detlev
aut |
Hauptverfasser: | |
Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | Deutsch |
Veröffentlicht: |
Berlin
Freie Universität Berlin
1975
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Schlagworte: | |
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adam_text | CONTENTS
1 SUMMARY 1
2 INTRODUCTION 2
2.1
THE CELL NUCLEUS 2
2.1.1 NUCLEAR COMPARTMENTS
3
2.1.2 THE NUCLEAR MATRIX 8
2.2
MASS SPECTROMETRY-BASED PROTEOMICS 15
2.2.1 MS
INSTRUMENTATION IN SHOTGUN PROTEOMICS 15
2.2.2 QUANTITATIVE MS-BASED PROTEOMICS
16
2.2.3 ORGANELLAR PROTEOMICS
18
3 MATERIALS 19
3.1 CHEMICALS AND BIOCHEMICALS 19
3.2
COMMERCIAL SOLUTIONS, KITS AND CELL CULTURE REAGENTS
21
3.3 ENZYMES 23
3.4
EUKARYOTIC CELLS 23
3.5 PROCARYOTIC CELLS 24
3.6 ANTIBODIES
24
3.7 PLASMID VECTORS 24
3.8 PRIMERS AND OLIGONUCLEOTIDES 25
3.9 EXPRESSION CONSTRUCTS 26
3.10 LABORATORY EQUIPMENT 27
3.11 LABORATORY DEVICES AND SCIENTIFIC INSTRUMENTS 29
3.12 SOFTWARE 31
3.13 INTERNET TOOLS AND DATABASES 31
4 METHODS 32
4.1 MAMMALIAN CELL CULTURE 32
4.2 IMMUNOFLUORESCENCE MICROSCOPY 33
4.3 MOLECULAR CLONING TECHNIQUES
34
4.4
TRANSFECTION OF EUKARYOTIC CELLS 41
4.5
CELLULAR AND NUCLEAR FRACTIONATION 42
4.6
FLUORESCENCE-ACTIVATED SORTING 44
4.7
PROTEIN BIOCHEMISTRY 45
4.8
MASS SPECTROMETRY-BASED PROTEOMICS 50
4.9 ADDITIONAL STATISTICAL AND BIOINFORMATIC ANALYSIS 56
5 RESULTS 58
5.1 A NOVEL STRATEGY FOR THE PURIFICATION OF THE NUCLEAR MATRIX 58
5.1.1 ESTABLISHMENT OF COMPARABLE DERIVATIVES OF CLASSICAL NUCLEAR
MATRIX PURIFICATION
STRATEGIES FOR PROTEOMICS 58
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5.1.2 AN IMPROVED FACS-ASSISTED PURIFICATION STRATEGY
60
5.1.3 MICROSCOPIC ANALYSIS OF PURIFIED NUCLEAR MATRICES 66
5.1.4 PROTEOMIC ANALYSIS OF THE NUCLEAR MATRIX
69
5.2 IMPLEMENTATION OF QUANTITATIVE PROTEOMICS IN THE DEFINITION OF THE
NUCLEAR MATRIX
72
5.2.1 SILAC-BASED PROTEOMICS ALLOWS ACCURATE QUANTIFICATION OF
SUBNUCLEAR PROTEOMES
72
5.2.2 ADDRESSING PROTEOME COVERAGE ISSUES IN NUCLEAR BOTTOM-UP
PROTEOMICS
77
5.2.3 THE REPRODUCIBILITY IN PROTEOMIC QUANTIFICATION OF COMPLEX
BIOCHEMICAL PREPARATIONS IS
ROBUST 81
5.3 QUANTITATIVE PROTEOMIC CHARACTERIZATION OF THE NUCLEUS 84
5.3.1 THE DEFINITION OF THE NUCLEAR PROTEOME
84
5.3.2 THE DEFINITION OF THE NM PROTEOME USING FILTERING AND
CLASSIFICATION CRITERIA
89
5.3.3 THE QUANTITATIVE NUCLEAR MATRIX PROTEOME
94
5.3.4 QUANTITATIVE NM ANALYSIS REVEALS FUNCTIONAL HIERARCHY IN NUCLEAR
ORGANIZATION
100
5.4 IMPLEMENTATION OF QUANTITATIVE PROTEOMICS IN THE DEFINITION OF THE
CAJAL BODY
PROTEOME
103
6 DISCUSSION 109
6.1 5.1 ORGANELLAR PROTEOMICS
109
6.1.1 PURIFICATION OF NUCLEAR SUBFRACTIONS
109
6.1.2 LC-MS/MS-BASED QUANTITATIVE PROTEOMIC ANALYSIS
112
6.2
THE NUCLEAR MATRIX
PROTEOME 118
7 REFERENCES 125
8 APPENDIX 143
8.1 ABBREVIATIONS
143
8.2 SUPPLEMENTARY DATA
146
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