Verfügbarkeit: Postkonditionierung mit inhalativ appliziertem Kohlenmonoxid schützt retinale Ganglienzellen der Ratte zeitabhängig vor einem Ischämie-/Reperfusionsschaden

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Bibliographische Detailangaben
Titel:	Postkonditionierung mit inhalativ appliziertem Kohlenmonoxid schützt retinale Ganglienzellen der Ratte zeitabhängig vor einem Ischämie-/Reperfusionsschaden
Von:	vorgelegt von Matthias Wilhelm Fuchs
Person:	Fuchs, Matthias Wilhelm 1986- Verfasser aut
Hauptverfasser:	Fuchs, Matthias Wilhelm 1986- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	Deutsch
Veröffentlicht:	Freiburg (Breisgau) 2017
Schlagworte:	Hochschulschrift
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Beschreibung:	XIV, 154 Blätter Illustrationen, Diagramme 30 cm

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adam_text	AUS DER KLINIK FUER ANAESTHESIOLOGIE UND INTENSIVMEDIZIN DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU GESCHAEFTSFUEHRENDER UND AERZTLICHER DIREKTOR: UNIV.-PROF. DR. MED. H. BUERKLE POSTKONDITIONIERUNG MIT INHALATIV APPLIZIERTEM KOHLENMONOXID SCHUETZT RETINALE GANGLIENZELLEN DER RATTE ZEITABHAENGIG VOR EINEM ISCHAEMIE- / REPERFUSIONSSCHADEN INAUG URAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU VORGELEGT 2017 VON MATTHIAS WILHELM FUCHS GEBOREN IN FREIBURG IM BREISGAU INHALTSVERZEICHNIS I. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ................................................................................VI II. ABBILDUNGSVERZEICHNIS .................................................................................XI III. TABELLENVERZEICHNIS .....................................................................................XIII IV. ZUSAMMENFASSUNG .......................................................................................... XIV 1. EINLEITUNG.........................................................................................................1 1.1. DER ISCHAEMISCHE SCHLAGANFALL................................................................................ 1 1.1.1. DEFINITION / AETHIOLOGIE / EPIDEMIOLOGIE DES ISCHAEMISCHEN SCHLAGANFALLES......................................................................................... 1 1.1.2. KLINISCHE PROBLEMATIK DES ISCHAEMISCHEN SCHLAGANFALLES ................... 3 1.1.3. GESUNDHEITSOEKONOMISCHE PROBLEMATIK DES ISCHAEMISCHEN SCHLAGANFALLES......................................................................................... 3 1.1.4. THERAPIE DES ISCHAEMISCHEN SCHLAGANFALLES..........................................5 1.1.4.1. GEGENWAERTIGE LEITLINIENBEHANDLUNG ....................................... 6 1.1.4.2. PROBLEM DER ZEITLICHEN THERAPIELIMITATION ............................... 7 1.2. ISCHAEMIE - REPERFUSION IM MODELL........................................................................ 8 1.2.1. DEFINITION................................................................................................... 8 1.2.2. BEGRIFFSKLAERUNG PRAEKONDITIONIERUNG ................................ .......................10 1.2.3. BEGRIFFSKLAERUNG POSTKONDITIONIERUNG ..................................................... 12 1.3. KOHLENMONOXID IN DER MEDIZINISCHEN FORSCHUNG ............................................... 12 1.3.1. PHYSIKALISCH / CHEMISCHE EIGENSCHAFTEN VON CO ................................. 12 1.3.2. TOXIKOLOGIE................................................................................................ 13 1.3.3. ENDOGENES HO-SYSTEM / PRODUKTION ...................................................... 13 1.3.4. KOHLENMONOXID ALS EXPERIMENTELLES THERAPEUTIKUM ............................ 16 1.3.4.1. BISHER BEKANNTE WIRKPRINZIPIEN ............................................... 16 1.3.4.2. APPLIKATIONSWEISE / AUFNAHME VON C O ................................... 16 1.3.4.3. DOSISFINDUNG .............................................................................. 17 1.4. TRANSIENTE RETINALE ISCHAEMIE-REPERFUSIONSSCHAEDIGUNG IM TIERMODELL ............. 19 1.5. RETINA - NEURONALES MODELLGEWEBE ....................................................................... 21 1.5.1. ENTWICKLUNG DER NETZHAUT......................................................................... 21 1.5.2. HISTOLOGISCHER AUFBAU DER NETZHAUT ........................................................ 21 1.5.3. BLUTVERSORGUNG DER NETZHAUT ................................................................... 24 1.5.4. AUFBAU DER PRIMAEREN SEHBAHN................................................................. 24 1.6. WISSENSCHAFTLICHE FRAGESTELLUNG........................................................................... 26 2. MATERIAL................................................................................................................... 27 2.1. LABOR ALLGEMEIN - REAGENZIEN / CHEMIKALIEN ........................................................ 27 2.2. LABOR ALLGEMEIN - LABORBEDARF / VERBRAUCHSMATERIAL .......................................... 27 2.3. LABOR ALLGEMEIN - G ERAETE........................................................................................ 29 2.4. BRADFORD PROTEIN ASSAY - REAGENZIEN / CHEMIKALIEN ........................................... 29 2.5. BRADFORD PROTEIN ASSAY - LABORBEDARF / VERBRAUCHSMATERIAL ............................. 29 2.6. BRADFORD PROTEIN ASSAY - GERAETE............................................................................ 29 2.7. WESTERN BLOT - REAGENZIEN / CHEMIKALIEN............................................................. 30 2.8. WESTERN BLOT - LABORBEDARF / VERBRAUCHSMATERIAL ...............................................31 2.9. WESTERN BLOT - GERAETE.............................................................................................. 31 2.10. EMSA - REAGENZIEN / CHEMIKALIEN....................................................................... 32 2.11. EMSA - LABORBEDARF / VERBRAUCHSMATERIAL......................................................... 34 2.12. EMSA - GERAETE ....................................................................................................... 34 2.13. RT-PCR - REAGENZIEN / CHEMIKALIEN ...................................................................34 2.14. RT-PCR - G ERAETE.................................................................................................... 35 2.15. TIERVERSUCH - REAGENZIEN / CHEMIKALIEN ............................................................35 2.16. TIERVERSUCH - LABORBEDARF / VERBRAUCHSMATERIAL ...............................................36 2.17. TIERVERSUCH - GERAETE ............................................................................................. 37 2.18. IMMUNHISTOLOGIE - REAGENZIEN / CHEMIKALIEN .................................................... 37 2.19. IMMUNHISTOLOGIE - GERAETE..................................................................................... 38 2.20. REAGENZIEN-HERSTELLUNG........................................................................................ 38 3. METHODIK................................................................................................................... 45 3.1. VERSUCHSTIERE............................................................................................................ 45 3.2. ETHISCHE RAHMENBEDINGUNGEN...............................................................................45 3.3. VERSUCHSAUFBAU....................................................................................................... 47 3.4. VERSUCHSDURCHFUEHRUNG............................................................................................50 3.4.1. FG-LABELING................................................................................................ 50 3.4.2. ISCHAEMIE / REPERFUSION............................................................................. 52 3.4.3. KOHLENSTOFFMONOXID-POSTKONDITIONIERUNG ............................................. 55 3.4.4. QUANTIFIZIERUNG DER RETINALEN SCHAEDIGUNG DURCH RGZ- AUSZAEHLUNG............................................................................................... 55 3.4.5. IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG.............................................................. 58 3.4.6. RETINAENTNAHME ZUR MOLEKULARANALYSE / BLUTENTNAHME ........................ 59 3.4.7. MOLEKULARBIOLOGISCHE ANALYSE................................................................. 61 3.4.7.1 BRADFORD PROTEIN ASSAY ............................................................. 61 3.4.7.1.1. DURCHFUEHRUNG BRADFORD PROTEIN ASSAY ...................... 62 5.4.7.2. SDS-PAGE / WESTERN BLOT.......................................................... 63 3.4.7.2.1. DURCHFUEHRUNG SDS-PAGE............................................ 65 3.4.7.2 2. DURCHFUEHRUNG WESTERN BLOT........................................68 5.4.7.3. ELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT ASSAY (EMSA) ........................... 71 3.4.7.3.1. HERSTELLUNG DER POSITIVKONTROLLE ZUM EMSA EXPERIMENT IN SY5Y ZELLEN..........................................72 3.4.7.3 2. DURCHFUEHRUNG GELHERSTELLUNG EMSA .......................... 73 3.4.7.3 3. DURCHFUEHRUNG KINASE REAKTION EMSA UND PROBENVORBEREITUNG.....................................................73 3.4.7.3 4. DURCHFUEHRUNG ELEKTROPHORESE EMSA UND FILMENTWICKLUNG...........................................................75 5.4.7.4. REAL-TIME-POLYMERASE CHAIN REACTION (REAL TIME PCR) ...........................................................................................75 3 4.7.4.1. DURCHFUEHRUNG REAL TIME PCR.....................................76 3.5. STATISTISCHE AUSWERTUNG......................................................................................... 79 3.5.1. GRUPPENGROESSE..................................................................... 80 3.5.2. DENSITOMETRIE............................................................................................. 80 3.5.3. AUSZAEHLUNG DER RETINALEN GANGLIENZELLEN...............................................81 4. ERGEBNISSE............................................................................................................ 82 4.1. CO POSTKONDITIONIERUNG MINIMIERT DEN ISCHAEMIE-INDUZIERTEN ZELLUN TERGANG VON RETINALEN GANGLIENZELLEN (RGZ) - MIT ABNEHMENDER EF FEKTSTAERKE AUCH MIT EINER LATENZ ZWISCHEN ISCHAEMIE UND CO EXPOSI TION BIS ZU 180 MINUTEN............................................................................................ 82 4.2. CO POSTKONDITIONIERUNG MINIMIERT DEN ISCHAEMIE-INDUZIERTEN ZELLUN TERGANG VON RETINALEN GANGLIENZELLEN (RGZ) UNBEEINFLUSST VON EINER PHARMAKOLOGISCHEN INHIBITION DER ERK-1 /2-MAPKINASE MIT DEM INHI BITOR PD98059........................................................................................................... 85 4.3. CO POSTKONDITIONIERUNG FUEHRT ZU EINER SUPPRESSION DER ISCHAEMIE INDUZIERTEN APOPTOSEKASKADE................................................................................ 87 4.4. CO POSTKONDITIONIERUNG REGULIERT DIE PHOSPHORYLIERUNG DER MITOGEN- AKTIVIERTEN-PROTEIN KINASEN (MAPK) ZEITABHAENGIG ................................................ 93 4.5. CO POSTKONDITIONIERUNG FUEHRT ZU EINER LOKALISIERTEN PHOSPHORYLIE RUNG DER MAP KINASE ERK-1/2 IN DER GANGLIENZELLSCHICHT DER RETINA ............... 96 4.6. CO POSTKONDITIONIERUNG HEMMT INFLAMMATORISCHE PROZESSE RETINALER GANGLIENZELLEN (RGZ)............................................................................................... 98 4.6.1. CO POSTKONDITIONIERUNG UNTERDRUECKT DIE ISCHAEMIE INDUZIERTE PROTEINEXPRESSION DES HITZESCHOCKPROTEINS 32 (HSP-32; HAEMOXYGENASE HO-1).............................................................. 98 4.6.2. CO POSTKONDITIONIERUNG HEMMT DIE DNA-BINDUNGSAKTIVITAET DES NUKLEAEREN TRANSKRIPTIONSFAKTORS NF- K B ZEITABHAENGIG .................. 101 4.7. CO MINIMIERT DIE GLIAAKTIVIERUNG IN DER RETINA ..................................................... 105 4.8. CO UNTERDRUECKT EINE ISCHAEMIE-INDUZIERTE ZELLMIGRATION PROLIFERIEREN- DER ZELLEN IN DIE RETINA............................................................................................ 106 4.9. CO POSTKONDITIONIERUNG MODULIERT DIE POSTISCHAEMISCHE SYSTEMISCHE LEUKOZYTENREKRUTIERUNG.......................................................................................... 109 5. DISKUSSION............................................................................................................. 112 5.1. CO-POSTKONDITIONIERUNG UEBT EINEN PROTEKTIVEN EFFEKT AUF DAS UEBERLE BEN RETINALER GANGLIENZELLEN NACH EINER I/R-SCHAEDIGUNG AUS - BIS HIN ZU EINER LATENZ ZWISCHEN SCHAEDIGUNG UND POSTKONDITIONIERUNG VON 3 STUNDEN.................................................................................................................. 115 5.2. POSTKONDITIONIERUNG MIT INHALATIV APPLIZIERTEM CO NACH RETINALER L/R- SCHAEDIGUNG UNTERDRUECKT DIE APOPTOSE RETINALER GANGLIENZELLEN (RGZ) ............. 117 5.3. CO-POSTKONDITIONIERUNG UEBT DIE ZELLULAERE WIRKUNG NICHT UEBER DEN ERK-1/2 SIGNALWEG AUS ............................................................................................ 119 5.4. CO-POSTKONDITIONIERUNG INHIBIERT DIE INFLAMMATORISCHE ANTWORT NACH EINER ISCHAEMIE / REPERFUSION .................................................................................. 121 5.5. CO-POSTKONDITIONIERUNG REDUZIERT DIE POSTISCHAEMISCHE LEUKOZYTEN REKRUTIERUNG UND UNTERDRUECKT DIE AKTIVIERUNG NEUTROPHILER GRA NULOZYTEN................................................................................................................... 126 6. ANSCHLIESSENDE FRAGESTELLUNGEN UND ZUKUENFTIGE SCHWERPUNKTE ........................... 128 7. LITERATURVERZEICHNIS.......................................................................................... 131 8. VEROEFFENTLICHUNGEN DER ERGEBNISSE........................................................................... 149 9. DANKSAGUNG................................................................................................................. 150 10. LEBENSLAUF................................................................................................................. 152 11. EIDESSTATTLICHE VERSICHERUNG................................................................................... 154
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