Gespeichert in:
| Titel: | Identifizierung und Charakterisierung früher Genomveränderungen in benignen Hirntumoren |
|---|---|
| Von: |
Birgit Meyer
|
| Person: |
Meyer, Birgit
Verfasser aut |
| Hauptverfasser: | |
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | Deutsch |
| Veröffentlicht: |
Aachen
Shaker
2001
|
| Schriftenreihe: | Berichte aus der Biologie
|
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
I Theoretischer Teil
Die Rolle von Tumorsupprcssorgcnen in der Tumorgenese
1 Einleitung 1
2 Die Entdeckung von Tumorsuppressorgenen 2
2.1 Die Knudson-Theorie 3
2.2 Die Identifizierung und Charakterisierung des Retinoblastom-Gens 4
3 Eine funktioneile Klassifizierung der Tumorsuppressorgene 5
3.1 Die klassischen Tumorsuppressorgene 5
3.2 Die Mutatorgene 7
3.3 Die umgebungsmodifizierenden Gene 7
4 Neue Aspekte zur Wirkungsweise von Tumorsuppressorgenen in der
Tumorgenese 8
4.1 Haplo-Insuffizienz und dominant negativer Effekt 9
4.2 Epigenetische Veränderungen 10
5 Tumorsuppressorgene und ihre Funktion in der Kontrolle des Zellzyklus 12
5.1 Der Gl/S-Kontrollpunkt im Zellzyklus 13
5.2 Der Metaphase-Kontrollpunkt im Zellzyklus 16
6 Tumorsuppressorgene und ihre Bedeutung in Apoptose-Signalwegen 17
6.1 p53-induzierte Apoptosewege 18
6.2 Das PTEN-Gen und seine Bedeutung im PI3K/AKT-Signalweg 21
7 Ausblick 23
II Praktischer Teil
Identifizierung und Charakterisierung früher Genomveränderungen in benignen
Hirntumoren
1 Einleitung 24
1.1 Klassifizierung und Eigenschaften von Gliomen, Meningiomen und
Hypophysenadenomen 24
1.1.1 Gliome 24
1.1.2 Meningiome 26
1.1.3 Hypophysenadenome 26
1.2 Genetische Veränderungen in benignen Gliomen, Meningiomen und
Hypophysenadenomen 28
1.2.1 Gliome 28
1.2.2 Meningiome 29
1.2.3 Hypophysenadenome 29
1.3 Zielsetzung 30
2 Material und Methoden 32
2.1 Patientenproben 32
jj Inhaltsverzeichnis
2.2 Bakterienstämme 33
2.3 Plasmide 33
2.4 Oligonukleotide 33
2.4.1 Mikrosatellitenmaiker 33
2.4.2 Sonstige Oligonukleotide 34
2.5 Chemikalien und Enzyme 34
2.6 Geräte 35
2.7 Isolierung von DNA 35
2.7.1 DNA-Isolierung aus Blut 35
2.7.2 DNA-Isolierung aus Tumorgewebe 35
2.7.3 Isolierung von Plasmid-DNA 36
2.8 Fluoreszenz-»M#«-Hybridisierung (FISH) und vergleichende
Genombybridisierung (CGH) 36
2.9 Restriktion von DNA 36
2.10 Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 37
2.11 Repräsentative Differenzanalyse (RDA) 37
2.11.1 Generierung der Amplikons 37
2.11.2 Hybridisierung und selektive Amplifizierung 38
2.11.3 Modifizierungen des RDA-Protokolls 39
2.12 Agaraosegelelektrophoresen 40
2.13 Elution von DNA-Fragmenten aus Agarosegelen 40
2.14 Immobilisierung von DNA an Nylonmembranen 40
2.15 Radioaktive Markierung von DNA-Fragmenten 41
2.16 Hybridisierung von immobilisierter DNA 41
2.17 Klonierung von DNA-Fragmenten 42
2.18 Herstellung von Differenzklon-Banken 42
2.19 Sequenzierung 43
2.20 Sequenzanalyse 43
2.21 Mikrosatellitenaualyse 44
2.22 SSCP-Analyse 45
2.23 Lokalisierung von DNA-Fragmenten im menschlichen Genom 45
2.23.1 Monochromosomale Zellinien 45
2.23.2 Kartierung mit dem Stanford G3 Radiation Hybrid Panel 46
3 Ergebnisse 47
3.1 Untersuchungen verschiedener Gliome auf genetische Veränderungen 47
3.1.1 Darstellung der Gliome mittels CGH-Analyse 47
3.1.2 Identifizierung von Verlusten im genetischen Material von Gliomen mit Hilfe der
RDA-Methode 49
3.1.2.1 Anwendung der RDA bei DNA-Proben von ausgewählten Patienten mit benignen
Gliomen 51
3.1.2.2 Analyse des Differenzproduktes 16094 52
3.1.3 Charakterisierung einer 2D-Spot-Veränderung in 9q34 59
3.2 Untersuchungen von Meningiomen und Hypophysenadenomen auf genetische
Veränderungen 64
3.2.1 Vorcharakterisierung der Tumore 64
3.2.1.1 MikrosatellitenanalysebeiMeningioraen 64
3.2.1.2 Darstellung der Meningiome mittels CGH-Analyse 65
3.2.1.3 Darstellung der Hypophysenadenome mittels CGH-Analyse 67
3.2.2 RDAmit der Blut- und Tumor-DNA ausgewählter Meningiome und eines
Hypophysenadenoms 68
3.2.2.1 Die Analyse der Differenzprodukte 16250 und 16738 70
3.2.3 Charakterisierung der Region 1 lq21-23 bei Hypophysenadenomen über
MikroSatelliten-und Mutationsanalysen 73
Inhaltsverzeichnis III
4 Diskussion 77
4.1 Darstellung der Tumore mit Hilfe der CGH-Analyse 77
4.2 Identifizierung von deletierten Bereichen in der Tumor-DNA mit Hilfe der RDA-
Technik 84
4.2.1 Identifizierung von putativ tumorspezifischen Veränderungen bei benignen
Gliomen mit Hilfe der RDA-Technik 85
4.2.2 Identifizierung tumorspezifischer Veränderungen bei benignen Meningiomen und
Hypophysenadenomen mit Hilfe der RDA-Technik 89
4.2.3 Anwendbarkeit der RDA-Methode zur Identifizierung von genetischen
Veränderungen in Hirntumoren 91
4.3 Charakterisierung eines 2D-Spot-Verlusts in benignen Gliomen in der
chromosomalen Region 9q34 92
4.4 Charakterisierung einer in Hypophysenadenomen deletierten Region auf
Chromosom llq21-23 95
5 Zusammenfassung 98
6 Literaturverzeichnis 99
7 Anhang 122
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